大型真菌蛋白提取试剂盒

产品货号：

HR0063

中文名称：

大型真菌蛋白提取试剂盒

英文名称：

Large Fungal protein extraction kit

产品规格：

50T|100T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒适用于从各种大型真菌（蕈菌）类样本中提取总蛋白。试剂盒组分针对厚细胞壁样本进行优化，提取过程简单方便，可在1小时内完成。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
总蛋白提取液含多种有效成分，可充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

保存：蛋白提取液2～8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期1年。

保存事项

离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、PBS、蛋白定量试剂盒

注意事项

提取液制备：
每500μL冷的提取液A中加入5μL提取液B和2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
注：
● 根据需要处理的样品数量准备提取液，蛋白酶抑制剂不可以一次全部加入提取液A。
● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
取100～200mg真菌组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，将样本进行液氮研磨。
注：
● 没有液氮研磨条件也可以直接用提取液A进行研磨。
● 或者加入提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆处理。
研磨后加入500μL提取液A充分混匀。
在4℃条件下振荡20～30分钟。
注：
● 细胞壁较厚的样本需要进一步延长振荡时间。
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌总蛋白。
上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
试剂A用量可以根据情况进行调整，样本较小时减少试剂A每次用量。
用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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